期刊简介

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  • 杂志名称:上海预防医学杂志
  • 主管单位:上海市卫生局
  • 主办单位:上海市预防医学会
  • 国际刊号:1004-9231
  • 国内刊号:31-1635/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:首届《CAJ-CD规范》执行优秀期刊期刊收录:维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏
上海预防医学杂志2009年第04期

大肠杆菌O157:H7实时荧光PCR快速检测方法的建立

徐德顺;沈月华;程平庆

关键词:荧光定量PCR, TaqMan探针, 大肠杆菌O157:H7
摘要:[目的] 利用特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量PCR技术,建立大肠杆菌O157∶ H7污染的快速敏感特异的检测方法. [方法] 以大肠杆菌O157∶ H7的rfbE基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以大肠杆菌O157∶ H7菌株提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和Mg2+浓度,以大肠杆菌O157∶ H7和10种相关细菌考核检测体系的灵敏性、稳定性和特异性. [结果] 建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.6μmoL/L、0.8μmoL/L,Mg2+浓度为4 mmoL/L时,具有良好的特异性和敏感性.在10株相关菌株的检测中,除大肠杆菌O157∶ H7出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性.在纯菌条件下,定量检测低限为17cfu/mL.同一样品重复检测3次Ct值的变异系数均小于5%. [结论] 该方法特异性强,稳定性高,操作简便快捷,适应食品微生物检验发展需要,具有较大的推广及应用价值.